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培養箱知識

原位雜交中探針的選擇
生化培養箱DNA探針、RNA探針和寡核苷酸探針均能通過不同的酶促分子反應進行標記。寡核苷酸探針的長度較短,因此避免了探針內部退火的問題,在雜交時的滲透能力也更好,探針與靶標的接觸這是影響原位雜交是否成功的重要因素之一。DNA探針、RNA探針在合成時需要控制探針片段長度,通常300-1000bp左右,能覆蓋到較長片段的靶核酸序列,增加檢測的靈敏度。
就DNA探針和RNA探針的比較,DNA探針在雜交過程中會出現探針雙鏈之間退火的可能,也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體,從而影響其滲透能力。而RNA 探針的應用,將提高DNA-RNA雜交子的熱穩定性。
Tips:RNA探針因其單鏈、高分子結合力、可適應高溫雜交的特性,其檢測特異性和靈敏度均優于DNA探針。常用的RNA探針標記方法為構建質粒后進行轉率合成。通過PCR擴增的方法,可以更方便地進行RNA探針的制備;RNA探針合成后,還需驗證其對目標片段檢測的靈敏度和特異性。
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